蜂蜜中寡糖的鑒定

    蜂蜜的主要成分為果糖、葡萄糖和水。目前市場出現(xiàn)的假蜂蜜中常常添加大量糖漿，含有較多寡糖成分。通過檢測蜂蜜樣品中的是否出現(xiàn)寡糖，能快速、可靠地鑒別常規(guī)摻假蜂蜜。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

本實(shí)驗(yàn)以固相萃取法對(duì)市售蜂蜜進(jìn)行樣品前處理，聯(lián)合薄層色譜，檢測蜂蜜中的寡糖成分，以此鑒定蜂蜜是否摻假。該方法可準(zhǔn)確鑒別常規(guī)摻假蜂蜜，簡單可靠，并能減少有機(jī)溶劑的使用量。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物：寡糖。

三、適用范圍：《中.華人民共和國藥典2015版一部·蜂蜜》。

四、方法原理：試樣中的高分子糖，經(jīng)活性炭-硅藻土小柱的富集、濃縮，再用薄層色譜法分離、檢測。經(jīng)過與摻有一定含量的麥芽五糖的純蜂蜜比較，來判定蜂蜜中寡糖的存在。

五、實(shí)驗(yàn)方法

1、樣品處理：取樣品 2g，置燒杯中，加入10mL水徹底溶解。

2、蜂蜜專用柱凈化

（1）活化：25mL水，過柱速度1秒/滴（用超純水活化小柱時(shí)，注意在液面下降至小柱填料上端時(shí)，可添加樣品溶液上樣，切記活化過程中不能將液面抽干，否則會(huì)影響小柱對(duì)寡糖的保留效果）

（2）上樣：在50mL燒杯中稱取2g樣品溶于10mL水后，緩慢加入到蜂蜜專用柱上（需要用固相萃取裝置，抽取一定的真空度以確保液體能夠滴出小柱）

（3）淋洗：用7%乙醇25mL淋洗，不收集淋洗液

（4）洗脫：用50%乙醇10 mL洗脫，收集洗脫液

（5）濃縮：收集的洗脫液置于65 ℃水浴中減壓濃縮至干（旋蒸濃縮的時(shí)候25mL雞心瓶，防止損失樣品；可以少量多次地添加溶劑進(jìn)行復(fù)溶）

（6）復(fù)溶：殘?jiān)?/span>30%乙醇1mL使之溶解，搖勻。溶解時(shí)候要注意確保殘?jiān)耆珡?fù)溶

3、薄層色譜條件

薄層板：硅膠G 薄層板，110℃活化1小時(shí)

展開劑：正丙醇-水-三乙胺（60:30:0.7）

點(diǎn)樣量：3uL

顯色劑：苯胺-二苯胺-磷酸的混合溶液(取二苯胺1g，苯胺1mL，磷酸5mL，加丙醇至50mL，混勻）

顯色方法：噴以顯色劑，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置的下方，應(yīng)不得顯斑點(diǎn)。

六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與判斷標(biāo)準(zhǔn)

從恒溫干燥箱中取出薄層板，觀察TLC板的顯況，純蜂蜜只在Rf值0.35以上的區(qū)域有2~3個(gè)藍(lán)色中帶灰色或咖啡色的斑點(diǎn)，相比較麥芽五糖或混有麥芽五糖的蜂蜜卻是從原點(diǎn)開始呈現(xiàn)藍(lán)色帶狀樣的斑點(diǎn)群。